荧光western blot的一些建议

荧光western blotting是一种荧光标记检测抗体直接检测蛋白表达水平的技术。由于数字成像技术和荧光western blotting试剂的最新进展，这种方法正变得越来越流行。不太确定这个技术，开展荧光western blotting的原因。

如果你决定尝试在实验室开展荧光western blotting，可以使用以下小技巧来优化你的protocol和增强你的WB经验。

提高灵敏度

»          使用高灵敏度的标签。量子点纳米球荧光二抗将帮助实现更高的灵敏度

»          如果无法检测到目标蛋白，可以尝试将膜干燥后再显影，干燥可能会增加信号强度4­-10倍

»          减少样品、一抗和二抗的浓度，这样可以最大限度地减少实验样品中的非特异干扰

»          换用不太强的封闭剂可以帮助增加信号强度，但这也会增加非特异信号。例如将酪蛋白稀释到0.5倍，或使用鱼或牛血清白蛋白(BSA)封闭剂。

降低非特异性吸附

»          使用酪蛋白作为封闭剂，可以最大限度地减少非特异性结合

»          如果信号很强且有很多非特异性结合，可以稀释一抗和二抗浓度

减少背景荧光

»          使用长波长的荧光抗体(如620nm)可以大大降低膜的自发荧光。

»          使用短波长的荧光抗体(如520nm)，检测含量丰富的靶点，如内参蛋白(GAPDH)

»          使用低荧光(LF)-PVDF膜，因为它们可以最小化背景电平(与常规PVDF膜相比，在某种程度上，硝化纤维素膜)

»          避免使用彩色ladder，尽量使用非预染或蓝色预染ladder，ladder上样尽量少